UV-1800PC紫外可见分光光度法测定维生素B12含量

维生素[U1]B12是含钴的有机药物，为深红色结晶，又称为红色维生素B12或氰钴胺，是唯一含有主要矿物质的维生素。测定维生素B12片剂含量的传统方法是运用紫外可见分光光度计，以吸光系数法为测定含量依据，但是该方法对仪器精密度要求较高。标准曲线法是紫外可见分光光度法中最经典的方法，若认定一台仪器，固定 其工作状态和测定条件，则该方法可消除因仪器而产生的一些误差，且操作简便易行。

1  仪器与试药

1.1  仪器

UV-1800PC型紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）。

1.2  试药

维生素B12对照品（中国药品生物制品检定所）；维生素B12片剂（亨瑞达制药有限公司，批号060801，060701，061002，060902，070303）。0.8滤膜［AUTOMATIC SCIENCE（TIANJIN） INSTRUMENT CO；LTD］。

2  方法与结果

2.1  测定波长的选择

维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。维生素B12在361 nm的吸收峰干扰因素少，吸收又最强，中国药典规定以361 nm处吸收峰的比吸光系数E1%1 cm值（207）为计算含量依据。本实验选择361 nm为测定波长，以标准曲线法为计算含量依据。

2.2  溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备：精密称定对照品维生素B12 0.0025 g，置于25 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。将溶解后的溶液放置冰箱中冷藏备用。

2.2.2 供试品溶液的制备：维生素B12片剂为糖衣片，取本品50片，除去糖衣，使其呈现粉红色，研细，精密称定研磨样品，约相当于维生素B12 1.25 mg(每片的标示量为25.0 μg),置50 mL容量瓶中，加水35 mL，充分振摇30 min使其溶解，加水稀释至刻度，密塞，再用力振摇10 min，静置，取上清液，用0.8 μm的微孔滤膜滤过，滤液放置冰箱中冷藏备用。

2.3  线性关系

标准曲线的绘制：精取2.2.1项下的储备液，用水分别按1.5、2、4、6、8、10、15、20倍稀释，摇匀。在361 nm波长处测定吸光度。

以吸光度A与质量浓度c绘制标准曲线，得回归方程Y=0.0193X+0.048,r=0.9937。结果表明维生素B12对照品溶液在5.00 μg/mL～100.00 μg/mL范围内质量浓度与吸收程度呈良好的线性关系。

2.4  精密度试验

精取浓度为100 μg/mL的对照品溶液在361 nm连续测定5次，测得维生素B12的平均吸光度为2.087，RSD为0.7%（n=5）。RSD数值较小，说明该方法精密度好。

2.5  稳定性试验

取同一供试品溶液，在冰箱中冷藏2 h、4 h、8 h、12 h、24 h后，按2.7项下含量测定法测定，计算得平均吸光度为0.468，RSD为0.99%（n=5）。结果表明供试品溶液在冷藏温度下24 h内基本稳定。

2.6  重复性试验

精取同一批号样品，分别按2.2.2项的方法制备一式5份的供试品溶液，按2.7项下含量测定法测定，计算得维生素B12的平均含量为22.6 μg/mL（批号为070303），RSD为 1.08%（n=5），说明该方法有较好的重复性。

2.7  含量测定

以水为空白，取2.2.2项下的滤液，摇匀，设定吸收波长为361 nm测定吸光度，按标准曲线法为计算含量依据。

维生素B12片剂的标示量为25.0 μg，由以上测定结果可知，山西亨瑞达制药有限公司生产的维生素B12片剂含量均在标示范围90.0%～110.0%之内。RSD较小，说明该厂生产的药品含量稳定。